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大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA试剂盒

大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA试剂盒
适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型,不需要任何分离步骤,操作十分简便、快速,数分钟便能得出结果,酶免疫测定方法操作时,所有反应试剂均在同一体系内进行。
特异性强高效可靠
重复性好,特异性强,灵敏度高
准确稳定,免费代测
质量保证,量大从优
仅供科研使用,不能应用于临床

  • 更新时间:2024-06-25
  • 产品型号:96T/48T
  • 厂商性质:生产厂家
  • 访  问  量:329
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详细介绍

大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA试剂盒

检测方法:酶联免疫法

品牌:佰利莱

标记物:HRP标记物

应用:定性/定量/酶活检测

贮藏条件:2-8℃

有效期:6个月

标本:血清、血浆、组织液、组织匀浆等


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一、组织匀浆的制备

1、取组织块(0.1g~0.5g)最少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。

2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。

3、匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。

① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成10%的匀浆液。

② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),镜检观察:

4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.

二、匀浆介质  一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。

三、样本保存:

植物组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如反复冻融,-20℃以下可保 存三个月,-70℃以下可保存六个月

试剂准备:

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1.标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

2. 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

试剂盒自备材料:

1)蒸馏水。

2)加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3)振荡器及磁力搅拌器等。


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大鼠丙酮酸激酶(PK)ELISA试剂盒

细胞样品前处理:

a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。

c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

2、后处理:

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的ELISA、Western和免疫沉淀等操作。

免责声明:

1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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