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大鼠ELISA试剂盒的组成结构及检测条件

更新时间:2023-08-29      浏览次数:410

ELISA试剂盒实验步骤多,新手操作者难免出错。这些错误很多都是细节不够造成的。得到世界科研工作者的认可及推崇,减少这种错误的方法有很多,尤其是国内生化领域的长足发展。


大鼠ELISA试剂盒组成结构:


1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。


2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。


3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。


4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。


5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。


检测大鼠ELISA试剂盒结果必要条件可分为三个:


1、ELISA加样步骤


在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下倒置混和,不要在混匀器上强烈振荡。


制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清天然凝固、待其收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液,再在其加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。


一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份,ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。


2、固相载体


加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴,以发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。


良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定,有些则需经预处理。


3、标本因素


血清标本可按常规方法采集,应留意避免溶血,红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。


如在冰箱中保留过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点,国外试剂均与特殊仪器配合应用,严格遵照划定操纵,必能得出正确的结果。


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