小鼠磷酸试剂盒的测定步骤及使用注意事项如下

更新时间：2026-01-28

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　　小鼠磷酸试剂盒是一种专用于定量检测小鼠生物样本（如血清、血浆、组织匀浆液或细胞裂解液）中无机磷酸盐（Pi）含量的生化检测试剂盒，广泛应用于代谢研究、肾功能评估、骨代谢调控、能量代谢（如ATP水解）及信号转导通路（如蛋白磷酸化/去磷酸化）等相关科研领域。该试剂盒基于经典的钼蓝比色法或酶促反应原理，具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点，适用于高校、科研院所及生物医药企业的实验室使用。

　　小鼠磷酸试剂盒的测定步骤及使用注意事项如下：

　　一、测定步骤

　　1.准备与配液

　　从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

　　用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

　　2.加样

　　取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置。

　　在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

　　3.温育与洗板

　　37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

　　4.加酶标工作液与再次温育洗板

　　每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

　　重复上述温育与洗板步骤。

　　5.显色与终止

　　每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，37℃避光显色15min。

　　取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

　　6.测定与计算

　　以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

　　根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。

　　二、使用注意事项

　　1.试剂保存与使用

　　试剂盒应保存在28℃，避免直接接触终止液和底物A、B。

　　不同批号的试剂盒组份避免混用（洗涤液和反应终止液除外）。

　　浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，但加热温度不要超过50℃。

　　2.加样与温育

　　各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温2025℃。

　　3.洗板与显色

　　洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

　　底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

　　4.其他注意事项

　　消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

小鼠磷酸试剂盒

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