小鼠磷酸试剂盒是一种专用于定量检测小鼠生物样本(如血清、血浆、组织匀浆液或细胞裂解液)中无机磷酸盐(Pi)含量的生化检测试剂盒,广泛应用于代谢研究、肾功能评估、骨代谢调控、能量代谢(如ATP水解)及信号转导通路(如蛋白磷酸化/去磷酸化)等相关科研领域。该试剂盒基于经典的钼蓝比色法或酶促反应原理,具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点,适用于高校、科研院所及生物医药企业的实验室使用。
基本工作原理:
1、双抗体夹心法:这是常用的原理,以小鼠蛋白酪氨s磷酸酶(PTP)检测试剂盒为例,先用纯化的小鼠蛋白酪氨s磷酸酶抗体包被微孔板,制成固相抗体。之后向包被单抗的微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体。经过温育并彻d洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠蛋白酪氨s磷酸酶的含量呈正相关。
2、竞争法:当待测物质具有多个抗原表位时可能会用到。先使未标记的抗原(样本中的磷酸化物质)与有限l的特异性抗体进行反应,然后再加入标记的抗原(通常是已知浓度且带有可检测标记物的相同或相似抗原)。标记抗原会与未标记抗原竞争结合有限的抗体结合位点。反应达到平衡后,分离游离的和结合的标记抗原,通过检测与抗体结合的标记抗原量来推算出样本中未标记抗原的含量。
3、间接法:主要用于检测样本中是否存在针对磷酸化相关物质的抗体。先将特异性的磷酸化抗原包被在微孔板上,加入待测样本,如果样本中含有相应的抗体,就会与包被的抗原结合。然后加入酶标记的二抗(能识别并结合一抗),经过温育和洗涤去除未结合的物质后,加入底物显色。根据颜色的深浅可以判断样本中抗体的含量。
优点:
1、灵敏度高:具备出色的检测下限,即使是微量的磷酸化蛋白也能被灵敏捕捉。这使得研究人员可以在疾病早期或细胞轻微变化时就察觉到信号差异,从而及时开展进一步的研究。比如在研究细胞信号转导通路中一些低表达的磷酸化蛋白时,使用小鼠磷酸试剂盒就能够准确地检测到其存在和变化,为深入探究细胞内的生理病理机制提供了有力支持。
2、特异性强:采用先进的抗体制备技术,能够特异性地识别目标磷酸化蛋白,有效避免了与其他类似物的交叉反应。无论是血清、血浆还是组织匀浆等不同类型的样本,都能实现准确的测定。例如在复杂的生物样本如全血样本中,即使存在多种其他蛋白质成分,该试剂盒依然可以精准锁定目标分子,确保检测结果的真实性和可靠性。
3、操作简便:设计人性化,实验步骤清晰明了。从样本处理到最终的结果读取,都有详细的说明书指导。即使是经验相对不足的科研人员也能快速上手,节省了大量的时间和精力。同时,配套齐全的试剂组分让整个实验过程更加流畅高效,不需要额外准备过多的试剂和材料,减少了实验的复杂性和误差来源。
4、稳定性好:保质期通常较长,在28℃低温保存下一般有6个月的保质期。并且经过严格的效价稳定性测试,如有些试剂盒所有组份做过42度7天破坏实验,产品效价降低幅度不超过7,能确保运输过程中的温度变化不会对试剂盒造成效价影响,保证了实验结果的准确性和可靠性。
5、服务完善:许多供应商提供免费代测服务和技术指导,对于外地客户还可以指导正确放置样本的保存方式后快递到技术部进行检测,本地客户则可享受免费上门取样服务。售后也有专业的技术指导,帮助解决实验过程中遇到的问题,确保实验顺利进行。
