激酶试剂盒是一种基于激酶酶的特性设计的检测试剂盒，用于测量激酶反应中所形成的特定产物（如ADP或磷酸化产物）的量，从而间接反映激酶的活性。激酶酶能够将ATP（三磷酸腺苷）上的磷酸基团转移到特定的底物上，生成相应的磷酸化产物，同时释放出ADP（二磷酸腺苷）或AMP（一磷酸腺苷）。通过测定这些产物的生成量，可以评估激酶的活性。
激酶试剂盒的使用需严格遵循操作规范，以下从样本处理、试剂准备、实验操作、结果分析、安全防护五个维度梳理关键注意事项：
一、样本处理：确保数据可靠性的基础
采集与保存
血清/血浆样本：使用不含热原和内毒素的试管，避免溶血（溶血会影响结果，如IKKα/β试剂盒明确要求禁用溶血标本）。
组织样本：需冰浴匀浆后离心取上清，避免蛋白质变性（如NADK试剂盒要求组织匀浆后4℃离心）。
细胞样本：超声波破碎时需冰浴操作，防止温度升高导致酶失活（如NADK试剂盒建议300W超声3s，间隔7s，重复30次）。
保存条件：短期使用可2-8℃保存，长期需分装后-70℃冷冻，避免反复冻融（如乙酸激酶AK试剂盒要求-20℃以下保存不超过6个月）。
预处理与稀释
若样本OD值超过标准品最高浓度，需用样本稀释液稀释后重测（如IKKα/β试剂盒建议稀释5倍后复测）。
浑浊样本需离心后取上清，避免颗粒干扰（如NADK试剂盒对液体样本的浑浊处理要求）。
二、试剂准备：细节决定实验成败
复溶与保存
粉剂试剂需离心后加蒸馏水溶解（如NADK试剂盒要求试剂一/二/四临用前加双蒸水溶解）。
部分试剂需-20℃冷冻保存，禁止反复冻融（如NADK试剂盒的试剂八需分装后-20℃保存）。
浓缩洗涤液可能有结晶，需37℃水浴助溶后稀释（如乙酸激酶AK试剂盒的20×洗涤缓冲液需1:20稀释）。
试剂平衡与避光
试剂盒从冷藏环境中取出后，需室温平衡15-30分钟（如pERK试剂盒要求室温平衡后使用）。
底物显色液需避光保存（如IKKα/β试剂盒强调底物变蓝后不可使用）。
三、实验操作：标准化流程是关键
加样与温育
使用高精度加样器，避免交叉污染（如肌酸激酶CK试剂盒要求微量移液器吸嘴不可混用）。
温育时需用封板膜密封，防止液体蒸发（如IKKα/β试剂盒要求37℃温育60分钟）。
显色步骤需严格控制时间（如乙酸激酶AK试剂盒要求37℃避光显色10分钟）。
洗涤与终止
洗涤需彻d，每次甩干孔内液体并拍干（如IKKα/β试剂盒要求重复洗板5次）。
加入终止液后需立即测定OD值（如乙酸激酶AK试剂盒要求15分钟内完成测定）。
四、结果分析：科学解读数据
标准曲线绘制
以标准品浓度为纵坐标，OD值为横坐标，用相关软件拟合直线回归方程（如IKKα/β试剂盒要求R²≥0.990）。
样本浓度需代入方程计算，若稀释则需乘以总稀释倍数（如乙酸激酶AK试剂盒要求乘以n×5）。
异常值处理
若样本OD值接近零或超过标准曲线范围，需调整样本量或反应时间（如NADK试剂盒建议减少样本量或缩短反应时间）。
五、安全防护：实验室安全的底线
个人防护
操作时需戴一次性手套，处理试剂和样本后彻d洗手（如肌酸激酶CK试剂盒要求所有样本视为潜在传染性物质）。
废弃物需按传染物处理（如乙酸激酶AK试剂盒要求所有废弃物按当地法规处置）。
试剂兼容性
避免使用含NaN3的样本（如乙酸激酶AK试剂盒明确NaN3会抑制HRP活性）。
不同批号试剂不得混用（如所有试剂盒均强调批号一致性）。
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更新时间：2025-08-26 
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