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关于细胞为什么会衰老,怎么可以检测出来

更新时间:2024-03-04      浏览次数:133

◆细胞为什么会衰老:

1、过量的大分子交联是衰老的一个主要因素,如DNA交联和胶原胶联均可损害其功能,引起衰老。

2、细胞代谢产物积累至—定量后会危害细胞,导致细胞的衰老。

3、自由基含有未配对电子,具有高度反应活性,可引发链式自由基反应,引起DNA、蛋白质和脂类,尤其是多不饱和脂肪酸等大分子物质变性和交联,损伤DNA、生物膜和重要的结构蛋白和功能蛋白,从而引起衰老各种现象的发生。

4、存在于细胞内部提供能量的线粒体,其遗传基因很容易发生突变,变异的积累很可能是人体老化的原因之—。

细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。怎么可以检测出来细胞衰老呢?按照以下检测方法步骤操作可以检测出细胞衰老:

◆细胞衰老检测方法与步骤:

(1)细胞接种前在6孔培养板中预先放置灭菌的细胞片,每孔加入1×10E5个细胞,37℃ 5% CO2条件下培养过夜,使细胞在细胞片上生长。

(2)在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液,加入×1 PBS,洗涤细胞1次,随后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,室温条件下固定3~5分钟。

(3)吸弃2%甲醛/0.2%戊二醛固定液,加入×1 PBS,洗涤细胞3次,每次3分钟。

(4)吸弃×1 PBS,加X-Gal溶液以浸没细胞片为宜,37℃孵育4~8小时或过夜,用保鲜膜包被6孔培养板以防染液蒸发。

(5)取出细胞爬片,去离子水冲洗2次,再次用固定液固定4分钟,流水轻轻冲洗。

(6)将细胞爬片按此顺序脱水、透明∶95%酒精I(2分钟)→95%酒精Ⅱ(2分钟)→100%酒精I(2分钟)→100%酒精I(5分钟)→二甲苯I(2分钟)→二甲苯Ⅱ(2分钟)。

(7)中性树胶封片。

(8)在普通光学显微镜下观察衰老细胞形态。

每张片子镜下计数400个细胞,确定X-Gal染色阳性细胞(衰老细胞)在细胞群体中的所占的百分比即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数×100%)。

◆细胞衰老检测注意事项:

①X-Gal溶液需要现用现配。

②细胞固定时间过长或固定之后清洗不干净,均会影响后续的酶反应。

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