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MDCK细胞宿主蛋白(MDCKCHP)ELISA检测试剂盒

更新时间:2023-06-05      浏览次数:406

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被MDCK细胞宿主蛋白(MDCKCHP抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的MDCK细胞宿主蛋白(MDCKCHP呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

检测范围

标准品(S0-S5)浓度依次为:0、12.5、25、50、100、200 ng/mL

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。 

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2.  灵敏度:最-低检测浓度小于1.0 ng/mL

3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6个月


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