趋化因子试剂盒是一种用于检测趋化因子含量的专业工具，在生命科学研究和临床诊断中具有重要意义。趋化因子是一类能够引导细胞定向迁移的小细胞因子或信号蛋白，通过与趋化因子受体的结合，调控免疫细胞的迁移和定位，参与炎症反应、免疫应答和组织修复等生理过程。
趋化因子试剂盒基于酶联免疫吸附测定法（ELISA）等原理，利用双抗体夹心法等技术，能够特异性地检测样本中的趋化因子水平。试剂盒中通常包含固相抗体、酶标记抗体、标准品、显色底物等关键组分，通过一系列温育、洗涤和显色步骤，最终利用酶标仪测定吸光度，从而计算出样本中趋化因子的浓度。
1、试剂准备
从试剂盒中取出已包被抗趋化因子抗体的酶标板、趋化因子标准品、酶标记物、底物溶液（A液和B液）、洗涤液、终止液等试剂，使用前让其在室温（20-25℃）下平衡，确保实验结果稳定。
若洗涤液是浓缩液，需依照说明书指示，用蒸馏水或去离子水稀释并充分混匀。
2、样本采集与处理
血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激。收集血液后，室温放置2小时或4℃过夜，然后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：可用EDTA、肝素或柠檬酸钠作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃、1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
细胞上清液：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的PBS（0.01M，pH=7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
3、标准品稀释与加样
参照试剂盒说明书，明确标准品的稀释倍数与步骤。通常试剂盒提供高浓度标准品母液，需逐步稀释成不同浓度的标准品溶液。
例如，用移液器精准吸取标准品母液，加入含相应体积稀释液的无菌EP管。吸10μL标准品母液至90μL稀释液，轻柔吹打混匀，实现10倍稀释。依此方法，依次得到不同浓度梯度标准品溶液。每次稀释后更换吸头，防止交叉污染。
将稀释好的标准品溶液依次加入酶标板标准品孔，每孔加100μL。加样时，移液器垂直悬空于孔上方，缓慢匀速注入，避免产生气泡，保证加样准确。为提高准确性和重复性，每个浓度标准品设2-3个复孔。
4、样本加样
将处理后的待测样本（如血清、血浆、细胞培养上清等）加入酶标板样本孔，每孔100μL。加样确保样本无气泡，加样量准确。
5、温育
加样完成，用封板膜密封酶标板，放入37℃恒温培养箱温育60分钟。严格控制温育时间和温度，保证实验结果的准确性。
6、洗涤
温育结束，小心揭去封板膜，弃去酶标板液体，倒扣在吸水纸上拍干。每孔加350μL洗涤液，静置1-2分钟，甩去洗涤液后再次拍干。重复此洗涤步骤5次，彻d去除未结合物质。每次洗涤后确保洗涤液充分去除。
7、显色
洗涤完成，每孔先加50μL底物A液，再加50μL底物B液，加样避免产生气泡，加完轻轻振荡酶标板混匀。将酶标板放入37℃恒温培养箱避光显色15-20分钟。此时，酶标记物催化底物反应，溶液逐渐显色，颜色深浅与样本中趋化因子含量成正比。
8、终止反应
显色时间到，每孔迅速加50μL终止液，轻轻振荡混匀，反应随即终止。加入终止液后立即进行吸光度测定，避免时间过长结果偏差。
9、酶标仪测定
将酶标仪检测波长设为450nm，若有双波长功能，同时设参考波长630nm以消除干扰。将终止反应后的酶标板平稳放入酶标仪，测定各孔吸光度值（OD值）。读取数据时保证酶标板位置正确，确保数据读取准确。
10、数据分析
以标准品浓度为横坐标，对应平均OD值（扣除空白对照OD值）为纵坐标，用专业软件绘制标准曲线。一般采用四参数拟合曲线方程确保准确性。
根据样本平均OD值（扣除空白对照OD值），在标准曲线上查找对应浓度值，即为样本中趋化因子的含量。若样本检测前稀释，根据稀释倍数校正浓度，得到原始样本中趋化因子的实际浓度。
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更新时间：2025-11-25 
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