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ELISA实验加样时产生气泡的原因及注意的细节

更新时间:2023-12-11      浏览次数:343

ELISA实验加样时通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到,加样时要避免出现气泡,这到底是什么原因呢?因为在做实验的过程中,有时为了打干净枪头里面的液体,很容易产生气泡,是不是这样对实验结果会后什么影响?

原因:

1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。

2.包被时有气泡的话,将导致包被不完-全实际包被里下降―–弱阳性甚至假阴性。

3.封闭时有气泡的话,将导致大里未结合位点的存在,引起非特异性结合-–本底增高,假阳性。

4.加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合––弱阳性甚至假阴性。

5.加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合––弱阳性甚至假阴性(竞争法相反-—–一假阳性>。

6.加显色液时有气泡的话-—–显色不完-全

7.加终止液时有气泡的话(1、不能完-全终止反应2、影响酶标仪比色,OD值增高)

8.洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能完-全洗去,做无用功。

注意事项:

精准的仪器和准确的操作是保证ELISA结果准确关键,怎样的加样方式才是正确呢?ELISA实验中一般有5次加样,即加标本、加检测抗体、加酶结合物和加显色底物及终止液。

1.实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感,每孔加入液体量误差会导致结果读数差别,因此避免仪器带来误差。

2.加样前,溶液充分混匀,垂直悬空加入液体,避免加在孔壁上,不可产生气泡。

3.加样时避免液体溅出,如有样本溅出,应用吸水纸轻轻拭干,并做相应记录。

4.如果加样枪漏气以至于加样的量不够,不能用枪吸出再加,做相应记录实验。

5.每次加样顺序一致,尤其底物、终止液顺序一致,保证每个孔显色时间相同。



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