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恒温扩增可取代变温PCR?技术优劣势看这里

更新时间:2023-03-13      浏览次数:440

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近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,基于核酸扩增的诊断方法已大量建立并广泛应用于人类疾病的实验室检测中,恒温扩增技术便是其中一种,与其他的核酸扩增技术相比,恒温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用的设备,所以它一经出现就被许多学者认为是一种有可能与PCR媲美的检测方法。
当前常见的等温扩增技术有环介导等温扩增技术、链替代等温扩增技术、滚环等温扩增技术、依赖解旋酶等温扩增技术、依赖核酸序列等温扩增技术、单引物等温扩增技术和核酸快速等温检测放大等技术。
为了更好地有选择地开发利用这方面技术,现就这些等温扩增技术的原理、特点及应用进行简要总结。33.png

依赖核酸序列的扩增技术 (NASBA)是在PCR基础上发展起来的一种新技术,是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,反应在41℃进行,可以在2h左右将模板RNA扩增约109倍,比常规PCR法高1000倍,不需特殊的仪器。
该技术一出现就被用于疾病的快速诊断和病人血清中HIV-1的定量检测。尽管RNA的扩增也可以使用反转录PCR技术(通过反转录形成单链DNA模板),NASBA相比则有自己的优势:可以在相对恒温的条件下进行(一般恒温为41摄氏度)。该技术用于医学诊断,相对传统的PCR技术更为稳定,准确。

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多酶等温快速扩增(Multienzyme Isothermal Rapid Amplification , MIRA)技术,一种模拟生物体内正常核酸扩增过程,在37℃条件下依靠多种功能蛋白协同作用下实现核酸的快速扩增。

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